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            章鱼彩票电脑-选修1 微生物的实验室培育

            admin 2019-05-22 272人围观 ,发现0个评论

            一、基础知识:

            (一)培育基

            1、概念:

                  人们依照微生物对养分物质的不同需求,制造出供其成长繁衍的养分物质——培育基。

            2、分类:

            1)按物理状况来分:培育基可分为固体培育基半固体培育基液体培育基

                    在液体培育基中参加凝聚剂琼脂后,制成琼脂固体培育基,它是试验室中最常用的培育基之一

            2)按功能来分:培育基可分为挑选培育基和辨别培育基

                 

            品种

            用处

            比如

            挑选培育基

            从很多微生物中别离出所需的微生物

            不参加氮源的无氮培育基能够别离出固氮菌

            辨别培育基

            辨别不同品种的微生物

            伊红—美蓝培育基使大肠杆菌的菌落出现黑色,能够辨别大肠杆菌

              

            3)按成分来分:可分为天然培育基和组成培育基

            3 培育基的成分:

                   一般都含有的基本成分:碳源、氮源、水、无机盐

            此外,培育基还需求满意微生物成长对PH、特别养分物质以及氧气的要求。

            特别养分物质,例如:成长因子(即细菌成长所必需的,而本身不能组成的化合物,如维生素、某些氨基酸、嘌呤、嘧啶等)

            1)碳源:

            意义:凡能供给所需碳元素的物质

            作用:构成生物体细胞的物质和一些代谢产品,有些是异养生物的动力物质

            首要来历:

              A、无机化合物:CO2 NaHCO3 

            B、有机化合物:糖类、脂肪酸、花生饼粉、石油等。

            2)氮源:

            意义:凡能供给所需氮元素的物质

            作用:组成蛋白质、核酸以及含氮的代谢产品

            首要来历:

              A、无机化合物:NH3 、铵盐、硝酸盐等

            B、有机化合物:尿素、牛肉膏、蛋白胨等

            3)水:

            含量:在生物体内含量很高,在低等生物体内含量更高

            作用:不只时优秀的溶剂,并且可维持生物大分子结构的安稳

            首要来历:培育基、大气、代谢产品等

            4)无机盐:

              意义:为微生物供给除碳、氮元素以外的各种重要元素,包含某些很多元素

            作用:细胞内的组成成分:生理调理物质;某些化能自养菌的动力;酶的激活剂

            首要来历: 培育基、大气等环境

            5成长因子(特别养分物质)

            意义:成长必不可少的微量有机物

            作用:溶剂的组成成分

            首要来历:维生素、氨基酸、碱基

            4、培育基制造的准则:

            意图要清晰

            养分要和谐

            PH要适章鱼彩票电脑-选修1 微生物的实验室培育合:

              5牛肉膏蛋白胨培育基是一种运用最广泛、最一般的细菌基础培育基

            (二)无菌技能

            1、概念:无菌技能又称无菌操作,泛指在培育微生物的操作中,一切避免杂菌污染的办法。

            2取得纯洁培育物的关键是避免外来杂菌的侵略。首要内容包含:

            1)对试验操作的空间、操作者的穿着和手,进行清洁和消毒。

            2)将用于微生物培育的器皿、接种用具和培育基等进行灭菌。

            3)为避免周围环境中微生物的污染,试验操作应在酒精灯火焰邻近进行。

            4)试验操作时,应避免现已灭菌处理的资料用具与周围的物品相触摸。

            2、消毒与灭菌:

            1)消毒和灭菌的比较

               项目

            消毒

            灭菌

            概念

            运用较为温文的物理或化学办法杀死物体外表或内部的部分微生物不包含芽孢和孢子

            运用激烈的理化要素杀死物体表里一切的微生物包含芽孢和孢子

            常用办法

            煮沸消毒法100 煮沸56 min

            巴氏消毒法7075 30 min80 15 min

            化学药剂消毒法(用75%酒精等进行皮肤消毒、用氯气消毒水源)

            紫外线消毒法

            灼烧灭菌、

            干热灭菌、

            高压蒸汽灭菌

            适用目标

            操作空间、双手等

            接种环、接种针、玻璃器皿、培育基等

            2)三种灭菌办法的比较:

            灭菌办法

            适用资料或用具

            灭菌条件

            灭菌时刻

            灼烧灭菌

            接种环、接种针或其他金属用具

            酒精灯火焰的充沛焚烧层

            直至烧红

            干热灭菌

            玻璃器皿(吸管、培育皿)和金属用具等

            干热灭菌箱内,160170  

            12 h

            高压蒸汽灭菌

            培育基等

            100KPa121

            1530 min

            3)酒精消毒液中酒精浓度对作用的影响:

                     70%的酒精灭菌作用最好。原因是:浓度过高,菌体外表蛋白质变性过快而凝聚成一层保护层,酒精不能进入其间;浓度过低,灭菌才干削弱。

            4)无菌技能措施的挑选准则:

               A、考虑作用:灭菌的作用比消毒好。

               B、考虑操作目标的承受才干:活体生物资料、操作者的手等只能选用消毒的办法,而不能选用灭菌的办法。

            二、试验操作——微生物培育中有关的试验操作

             (一)制备牛肉膏蛋白胨固体培育基

               1、牛肉膏蛋白胨固体培育基的配方:

            2、制备牛肉膏蛋白胨培育基的进程:

            1)核算:根据牛肉膏蛋白胨培育基配方分份额,核算各种成分的用量。

             2)称量:牛肉膏比较粘稠,可用称量纸称取。牛肉膏和蛋白胨都简单吸潮,称取时动作要敏捷,称后要及时盖上瓶盖。

            3)熔化:牛肉膏和称量纸+水,加热 取出称量纸。(确保粘附在称量纸上的牛肉膏也能溶于水中,削减差错。)→ 加蛋白胨和氯化钠 加琼脂(加热使其熔化,在此进程中,不断用玻棒拌和,避免琼脂糊底而导致烧杯决裂。)(琼脂作为凝聚剂。)→ 补加蒸馏水至100mL

            4章鱼彩票电脑-选修1 微生物的实验室培育)灭菌:

            将制造好的培育基转移到锥形瓶中,加棉塞,包上牛皮纸,并用皮筋勒紧,再放入高压灭菌锅灭菌。(灭菌前,用牛皮纸包紧盛有培育基的锥形瓶的意图:A、在灭菌时能避免水蒸气凝聚时浸湿棉塞;B、在取出盛有培育基的锥形瓶时,也能起到阻隔空气中杂菌污染的作用。)(培育基:高压蒸汽灭菌

            将培育皿用几层旧报纸抱紧,58套培育皿作一包,包好后放入干热灭菌锅内,在160170℃下灭菌2h。(培育皿不能用高压蒸汽灭菌,由于培育皿要坚持枯燥。)(培育皿:干热灭菌

            5)倒平板:待培育基冷却至50℃左右时,在酒精灯火焰邻近倒平章鱼彩票电脑-选修1 微生物的实验室培育板。

                 倒平板操作的留意事项:

               A、培育基灭菌后,需冷却至50℃左右时才干倒平板,原因是琼脂在44℃以下凝聚。

               B、培育皿翻开一条稍大于瓶口的缝隙,不要彻底翻开。

               C、整个操作进程要在酒精灯火焰胖进行,避免杂菌污染

               D、平板冷凝后要倒置,避免皿盖上的冷凝水落入培育皿

               E、若倒平板时,培育基溅在皿盖和皿底之间的部位,这个平板应丢掉。

            (二)纯化大肠杆菌

            1、纯化的原理:

                   在培育基大将细胞稀释或涣散成单个细胞,使其长成单个菌落,这个菌落便是一个纯化的细菌菌落。

            2、办法:

            1平板划线法

            概念:通过接种环在琼脂固体培育基外表接连划线的操作,将集合的菌种逐渐稀释涣散到培育基的外表。

                在数次划线后,能够别离到由一个细胞繁衍而来的肉眼可见的子细胞集体,称为菌落。

            操作进程:

            A、将接种环放在酒精灯火焰上灼烧,直到接种环烧红

            B、在火焰旁冷却接种环,并翻开盛有菌液的试管的棉塞

            C、将试管口通过酒精灯火焰

            D、将已冷却的接种环伸入菌液中,沾取一环菌液。

            E、将试管口通过酒精灯的火焰,并塞上棉塞。

            F、左手将章鱼彩票电脑-选修1 微生物的实验室培育培育皿的皿盖翻开一条缝隙,右手将沾有菌种的接种环敏捷伸入平板内,划三到五条平行线,盖上皿盖。留意不要划破培育基

            G、灼烧接种环,待其冷却后,从榜首区域划线的结尾开端往第二区域划线。重复以上操作,在三、四、五区域内划线。留意不要将最终一区的划线和榜首区相连

            H、将平板倒置,放入培育箱中培育。

            留意事项:

            A、榜首次划线以及每次划线之前都需求灼烧接种环灭菌,划线操作完毕后仍需灼烧接种环,每次灼烧的意图如下:

            a 、榜首次灼烧:避免接种环上或许存在的微生物污染培育基

            b 、每次划线之前灼烧:杀死前次划线完毕后接种环上残留的菌种,使每次划线的菌种来自前次划线的结尾。

            c 、划线完毕后灼烧:杀死接种环上残留的菌种,避免菌种污染环境和感染操作者

            B、灼烧接种环后,要待其冷却才干伸入菌液,避免温度太高杀死菌种

            C、划线时,最终一区不要和榜首区相连。

            D、划线时,用力要巨细恰当,避免用力过大将培育基划破。

            2稀释涂布平板法

            概念:将菌液进行一系列的梯度稀释,然后将不同稀释度的菌液别离涂布到琼脂固体培育基的外表,进行培育。在稀释度足够高的菌液里,集合在一起的微生物将被涣散成单个细胞,然后能在培育基外表构成单个的菌落。

            操作进程:

            A 、系列稀释操作:

            a 、将别离章鱼彩票电脑-选修1 微生物的实验室培育盛有9ml水的6支试管灭菌,并按101106的次序编号。

            b 、用移液管汲取1ml培育的菌液,注入101倍稀释的试管中。用手指轻压移液管上的橡皮头,吹吸三次,使菌液与水充沛混匀。

            c 、从101倍稀释的试管中汲取1ml稀释液,注入102倍稀释的试管中,重复第2步的混匀操作。一次类推,直到完结最终一支试管的稀释。

            留意:移液管需求通过灭菌。操作时,试管口和移液管应在离火焰12cm处。

            B、涂布平板操作:

            留意:

            a 、将涂布器结尾浸在盛有体积分数为70%的酒精的烧杯中。取出时,要让剩余的酒精在烧杯中滴尽,然后将沾有少数酒精的涂布器在火焰上点燃。

            b 操作中一定要防火!不要将过热的涂布器放在盛放酒精灯的烧杯中,避免点燃其间的酒精。

            3、平板划线法和稀释涂布平板法的比较:

            项目

            平板划线法

            稀释涂布平板法

            进程

            用接种环在固体培育基外表将集合的菌种逐渐涣散到培育基的外表

            将菌液进行一系列的梯度稀释,然后将不同稀释度的菌液别离涂布到固体培浮荡育基的外表,进行培育

            长处

            能够调查菌章鱼彩票电脑-选修1 微生物的实验室培育落特征,对混合菌进行别离

            能够计数能够调查菌落特征

            缺陷

            不能计数

            吸收量较少,较费事,平板不枯燥作用欠好,简单延伸

            图示

            相同点

            都运用固体培育基,若没有特别要求,两种办法都能够用来别离微生物                 

            (三)菌种的保存

            项目

            暂时保藏法

            甘油管藏法

            适用目标

            频频运用的菌种

            长时间保存的菌种

            培育基类型

            固体斜面培育基

            液体培育基

            温度

            4

            20

            办法

            菌落长成后与冰箱中保存,每36个月将菌种从旧的培育基转移到新鲜的培育基上

            将培育的菌液与等体积灭菌后的甘油混合均匀后与冷冻箱内保存。

            三、温馨提示,答题必备:

            1、依照物理状况,培育基的品种有固体培育基、半固体培育基、液体培育基

            2、培育基中含有碳源、氮源、水、无机盐成长因子等养分物质。

            3、试验室常用的灭菌办法有灼烧灭菌、干热灭菌高压蒸汽灭菌等。

            4、固体培育基的制造进程为:核算 → 称量 → 溶化 → 灭菌 → 倒平板

            5、微生物接种的常用办法有平板划线法稀释涂布平板法

            6、消毒的意图时杀死物体外表或内部的部分微生物(不包含芽孢和孢子),灭菌则是杀死物体表里一切的微生物,包含芽孢和孢子

            7、菌种保存的办法有暂时保藏法、甘油管藏法


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